1. 技术原理
DNBelab C4 技术是基于负压的液滴微流控系统[2]，通过引入自主专利的液滴标签技术 (Disc-seq: Droplet-indexed high-throughput single-cell sequencing)，将带有标签的捕获磁珠与单个细胞或者细胞核包裹在液滴中，采用 Droplet index 的技术实现磁珠的超泊松分布，在液滴中完成细胞裂解和捕获 mRNA 或 DNA 分子及用于识别来自同一液滴磁珠的标签序列，对 cDNA 和 Droplet index 进行文库构建和测序，即可一次性获得大量细胞的基因表达或染色质开放区基因信息。此技术与常规液滴单细胞测序技术如 Drop-seq 平台 1%-3% 的细胞回收率相比，回收率提高至 30%-60%, 显著提高了细胞的利用率，降低了单次细胞投入量。
2. 优势
1.稀有细胞高效捕获：高效捕获稀有类型细胞，实现新突破;
2.多种样本无挑剔：除常规活细胞悬液外，珍稀液氮速冻样本可实现细胞核水平研究;
3.测序数据高保真：搭配DNBSEQT测序系统，不怕单个细胞数据弄混;
4.性价比高，通量高。
3. 分析内容
3.1 矩阵分析：
- 测序结果统计
- 比对结果统计
- 质控和数据过滤
- 矩阵分析
3.2 标准分析：
- 测序结果统计
- 比对结果统计
- 质控和数据过滤
- 矩阵分析
- 高变特征筛选
- 主成分分析
- 细胞聚类分析
- 细胞类型注释(仅针对人或小鼠，基于SingleR软件注释)
- marker基因鉴定
- 特意marker基因分析
- 差异基因表达分析
- 差异基因表达GO功能分析(仅针对人或小鼠)
- 差异基因表达pathway功能分析(仅针对人或小鼠)
- 拟时序分析
3.3 高级分析（人、小鼠）：
- 聚类分析
- 细胞类型人工注释和校正
- 拟时序分析:基于Monocle2分析
- 细胞功能分析:差异富集分析
- 细胞互作分析:基于cellchat进行受配体分析
- PySCENIC转录因子分析
高级分析流程图
